产品货号:
ALH264
中文名称:
反转录预混合液
英文名称:
5×LabScript RT MasterMix
产品规格:
20μl×50次|20μl×100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品采用分子进化技术多点突变的新一代反转录酶,大幅度提高了稳定性和反转录效率。5×RT MasterMix为一管式反转录预混反应液,含有反转录所需的所有试剂(LabScript M-MuLV RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、Buffer),只需加入模板RNA和水即可进行反应。使得cDNA的合成更加的方便快捷,特别适合cDNA合成以后的两步法Real Time PCR检测。
- 第一链cDNA合成。
- 可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。
- 新一代反转录酶大幅度提高了稳定性和反转录效率。
- 全预混的反转录Mix,只需加入RNA和水,15分钟简单快速完成反转录。
- RNA模板的体积最多可加到总体积的80%,非常适合于低浓度RNA模板的逆转录反应。
- 预混合Mix在-20℃不冻结,减少了化冻和混匀时间,使用更简单。
- 本制品针对qPCR进行特别优化oligo dT和N6随机引物配比,使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始并具有相同的反转录效率,最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。
组分 | 20μL×50次 | 20μL×100次 |
5×RT MasterMix | 200μL | 400μL |
RNase-free H2O | 1mL | 2×1mL |
保存:-20℃保存,有效期12个月。
- 避免RNase污染。
- 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
- 5×RT MasterMix非常粘稠,溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失,用前请点甩离心后使用,并且避免吸头外壁沾附损失。5×RT MasterMix内包含的酶均为过量,即使每次按照3.6μL~3.8μL使用,也不影响使用效果。
第一链cDNA合成:
以20μL反应体系为例,也可以采用10μL反应体系。
- 将模板RNA在冰上解冻;RNase free H2O在室温(15~25℃)解冻,解冻后迅速置于冰上。使用前将每种
溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀,简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。 - 在RNAse free管里面加入以下成分:(建议使用PCR管冰上配制,置PCR仪反应)
注:Total RNA不超过2μg,mRNA不超过200ng (20μL体系)成分 用量 Total RNA/mRNA ≤ 16μL 5×RT MasterMix 4μL(见注意事项3) RNase-free H2O 至20μL - 移液器轻轻吹打混匀(总体积20μL)
如使用mRNA模板是来源于真核细胞(如人、小鼠的组织细胞)含有Poly(A)尾结构,42℃孵育15min。
如使用mRNA模板是来源于原核细胞(细菌)或者病毒等不含Poly(A)尾结构,25℃孵育10min,42℃孵育15min。
注意:如果模板具有复杂二级结构或高GC区域,可尝试将反应温度提高至50℃,有助于提高产量。 - 85℃加热5sec失活LabScript Hˉ RTase。
- 得到的cDNA产物可立即用于qPCR反应,或在-20℃保存,并在半年内使用;长期存放建议分装后在-70℃保存。cDNA应避免反复冻融。
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